Transwell迁移、、侵袭实验

Transwell实验是一种体外研究细胞迁移和侵袭能力的经典方法，
，，，其核心是通过多孔膜分隔上下腔室，，，模拟细胞在趋化因子梯度下的跨膜运动。。。。迁移实验评估细胞定向运动能力，
，，，而侵袭实验需额外包被基质胶（如Matrigel）以模拟细胞外基质（ECM），，，，检测细胞降解基质并穿透膜的能力。。
。。广泛应用于肿瘤转移、、、、免疫细胞趋化、
、、药物筛选及细胞间相互作用等领域。。。

  1、、、若为侵袭实验，
，，，Transwell膜面加Matrigel。。。在4℃条件下（冰上操作）将Matrigel胶用无血清的细胞培养基进行稀释。。。
。取50-100μl添加到Transwell小室，，，37℃培养箱中孵育3 h使其凝胶化；
  2、、取对数生长期细胞用0.25%胰酶消化细胞，，，，等待细胞变圆后收集细胞，
，，
，1000rpm离心3min，，离心后弃去上清，，用PBS洗1遍
，
，，接着用无血清培养基悬浮细胞，，，
，调整细胞密度至1×10^5cells/ml；
  3、
、、在24孔板下室加入500μL含10% FBS或趋化因子的培养基，，，然后用镊子将Transwell小室置于24孔板内，，，取细胞悬液200μL加入上室，，，
，最后放入培养箱中培养24 h
；
  4、、用镊子小心取出小室，，，，吸干上室培养基
，，
，，用棉签轻轻擦拭上室内的细胞，，，，取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL
，，，将小室放入后室温固定30min；
  5、
、、、取出小室
，，，吸干上室固定液，，移到预先加入约800μl 0.1%结晶紫的孔中，，，
，室温染色20min。。。取出小室
，，用PBS轻柔清洗2次，，，
，除去未与细胞结合的结晶紫；
  6、、显微镜下进行观察和拍照，，，随机选取5个视野
，
，计数呈紫色的阳性细胞。
。。。

 1
、、团队经验丰富，，，，成员稳定；
 2、、、、提供原始数据以及试验记录，，，，保证数据真实可靠；
 3
、、实验进行三重复
，，，保证数据的可重复性。
。。